科百特深层过滤新应用
大肠表达硫酸铵蛋白沉淀收集、复溶过滤

硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。盐浓度通常用饱和度来表示，硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用广泛。

大肠杆菌表达的载体蛋白（CRM197）纯化选用硫酸铵沉淀法结合离心的方式对有效成分进行纯化操作大肠杆菌发酵液经均质破碎，澄清处理后使用硫酸铵进行蛋白沉淀，然后采用离心方式收集沉淀，经过沉淀复溶后再次采用离心进行澄清处理。两步离心工艺操作繁琐，蛋白收率较低。本报告主要介绍采用Cobetter深层过滤产品，在同一过滤器上实现硫酸铵沉淀收集和复溶蛋白的过程，并可以直接达到澄清的目的。

实验条件

针对初始浊度为355NTU的均质离心后料液，经硫酸铵沉淀后分别采用型号为0140PC的深层过滤产品（23cm2，0.04-9.0μm）进行蛋白收集、在线复溶、澄清过滤。控制进液流速100-150LMH进行恒流过滤。

深层过滤操作流程

实验数据

测试数据汇总

过滤压力与浊度随载量增加趋势图

实验结论

深层滤膜针对大肠表达（CRM197）硫酸铵沉淀，收集复溶蛋白与离心工艺有同样较好的载量和回收率(>85%)的表现，相比传统离心工艺在操作步骤和工艺时间上有明显优势。